(资料图片)

近几年，加州鲈在我国的养殖产量平稳增加，开展单性养殖是变革养殖模式的有效举措之一。如果开发高效快速的雌雄鉴定方法，结合分子选育技术，或将实现产业革新。

加州鲈雌雄个体在外部形态差异不明显，想要通过外部形态判断其性别十分困难，在极端高温、低温或在性别激素的诱导下，也会出现性别逆转的现象。如果开发一种可以快速准确鉴定加州鲈遗传性别的分子标记技术，再借助雌核发育技术，可能实现加州鲈的单性养殖，促进其产业的发展。近十年来，随着下一代测序技术(Next-Generation Sequencing, NGS)和生物信息学的快速发展，使得全基因组测序成本更低，周期更短。通过结合高密度连锁图谱构建，QTL定位等技术，使得鱼类性别特异性标签的开发更加高效。

为此，中国水产科学研究院淡水渔业研究中心在江苏省加州鲈产业重大技术协同推广计划（2022-2023）项目的支持下，首先，对雌雄各30尾加州鲈美国北方亚种个体进行解剖，观察性腺组织并确认表型性别（图1），通过对尾鳍样品进行全基因组重测序分析，筛选加州鲈性别特异性SNP标记，定位加州鲈性别连锁区间与性别决定基因。同时，为了验证加州鲈性别特异性SNP标记的准确性和可靠性，项目组分别在4个不同种群的加州鲈中进行实验（图2），即“优鲈3号”、“优鲈1号”、“美国北方亚种”和“台湾种群”（每个种群各采集32尾共128尾）。

结果表明，借助30尾雌鱼与30尾雄鱼的全基因组重测序数据，结合Fst值分析，筛选了123个性别相关SNP位点，通过对比参考基因组发现绝大多数SNP都定位在Chr7染色体上，并且将其性别连锁区间缩小在3.44Mb之内。在此区间内鉴定了一个性别特异性标记SNP21。并在4个群体中设计了两种验证实验：一种是基于内切酶技术的PCR-RFLP，即采用限制性内切酶TaaI，该技术仅需在65℃条件下酶切15min，即可分离出雌雄差异片段，且电泳条带分离情况均清晰可见（图2），操作简单准确率高，适合低通量个体的检测。另外一种是Taqman-MGB实时荧光PCR检测技术（图3），该技术一次可以检测200-300个样品，大大提高检测效率。

上述两种检测技术的性别鉴定准确率在98%以上。

关键词：